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裂解組織和細胞的方法
裂解細胞最常用的方法是物理的方法。裂解大部分動物
細胞所用的力比較溫和,而裂解植物和細菌的細胞則可能需
要很大的力,因為在這些有機體中存在著細胞壁,使細胞的裂
解更為困難。物理的方法可以按照是由細胞和固體之間的切
變力產生裂解(固體切變法),或是在細胞懸浮液中由液體切
變而產生裂解(液體切變法)來分類。
固體切變法:現代的固體切變法是在用砂子或磨蝕
劑在研缽和研杵之間研磨的方法基礎上發(fā)展而來的。這些方
法現在禾常用于裂解動物細胞,因為可以有一些別的較溫和
的方法,但是它們被用于植物和細菌細胞的工作。通常,磨蝕
劑顆粒必須和細胞的大小相等,并且在研磨時必須保持其棱
角,但有一個缺點,在操作過程中可能會損傷較大的細胞器
(例如葉綠體)。
其他方法:在裂解細胞中已經使用的其他方法包括
細胞經滲透沖擊而破裂;用酶消化細胞壁例如從蝸牛中得到
的復合酶制禮它含有纖維素酶、殼糖酶和脂酶;以及使用溶
菌酶。細胞交替的冰凍和融化;自溶作用;以及使用乙酸乙酯
或甲苯一類的有機溶劑也已成功地用于某些細胞類型。
從上述各種使細胞裂解所用的技術中,很明顯的是大部
分方法都產生熱。由于溫度上升使大部分酶變性,因此必須
使所有的細胞裂解和細胞器分離的操作過程在低溫下進行。
在O℃左右的冷室中工作;通過周圍的冰來冷卻細胞懸浮液;
使用冷的懸浮介質和容器一般都可以做到這一點。但是,必
須注意,有少數酶對冷是不穩(wěn)定的,在冷卻時可能會喪失它們
的活性。
不同的生物組織在勻漿時會出現特殊的問題,這主要通
過反復的試驗來解決。為了得到適當的重復性,必須小心地
注意各種因素,例如溫度、裂解的時間、速度和壓力的變化。理
想的勻漿是能使它十分順利地進行以后的分級分離,或正如
已被公認的:“勻漿的好壞要在分級分離中來驗證”。
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